小鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒【检验方法】
1、试剂、样本准备
试剂准备
将试剂盒置室温(18~26℃)平衡15~30分钟。
从试剂盒中取出浓缩洗涤液,用新鲜的纯化水1:1稀释后加入洗板机的洗液瓶中。
样本准备
标准品的稀释:用标准品稀释液按照下图表将标准品稀释,制备1-5号标准样品。为保证结果的准确性,每次实验请配置新的标准品溶液。
1200 ng/L 5号标准品 150 μL的原倍标准品加入150 μL标准品稀释液
600 ng/L 4号标准品 150 μL的5号标准品加入150 μL标准品稀释液
300 ng/L 3号标准品 150 μL的4号标准品加入150 μL标准品稀释液
150 ng/L 2号标准品 150 μL的3号标准品加入150 μL标准品稀释液
75 ng/L 1号标准品 150 μL的2号标准品加入150 μL标准品稀释液
2、试验条件
在室温(18~26℃)严格按照试剂盒说明书进行操作。
3、操作步骤
取出所需的PCT抗体包被板反应条置于微孔架上(立即将剩余的微孔反应条放回铝箔袋中,并重新密封铝箔袋)。
分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 μL,待测样品孔中先加样品稀释液40 μL,然后再加待测样品10 μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,置37℃恒温箱孵育30分钟。
小心揭掉封板膜,弃去孔内液体,洗涤液注满各孔、静置30秒,甩干,重复5次,拍干。或者利用洗板机洗涤:程序4个循环,每孔350 μL,洗涤后拍干。
加入酶结合物,每孔加入酶标试剂50 μL,空白孔除外,充分混匀,置37℃恒温箱孵育30分钟。
重复操作程序③
加入显色剂A50 μL,再加入显色剂B50 μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
每孔加终止液每孔50 μL,充分混匀,终止反应。
以空白孔调0,用酶标仪依序测量各孔在450 nm波长的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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【检验方法的局限性】
PCT的水平作为诊断、监测重症感染患者的常规指标,不能作为是否存在细菌和病毒感染的依据。对PCT检测结果的解释需结合其他临床检查结果和根据临床疾病诊断的程序。
需要注意的是:
在病毒感染或非感染性炎症反应时,血PCT水平不升高或仅有轻度升高。
PCT水平测定不能特异性反映病原体类型及其对抗生素的敏感性和耐药性;必须同时结合病原学检查和药物敏感试验结果以提高治疗的针对性。
接受OKT3免疫抑制治疗的移植患者PCT水平常有提高,这可能是细胞因子释放综合征的继发表现,应用OKT3后PCT水平的升高并不一定提示感染的存在,须结合其他指标综合分析。
脓毒血症患者不论是否接受免疫抑制治疗,其在发生脓毒症的最初3天内PCT水平并无差异,随后免疫缺陷患者在第3~5天时PCT 值有所减低,而免疫力正常的患者至第5天后PCT水平才开始下降,对于脓毒血症患者建议采取动态观察。
【产品性能指标】
特异性:
20份正常人血清PCT 检测结果不得出现一份大于500 ng/L。
检出量:检出量为40ng/L。
线性范围:75ng/L~1200ng/L,相关系数r应不低于0.98。
稳定性:37℃放置3天,检定结果应达到标准。
小鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒【注意事项】
试剂盒使用前应置于室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
使用时,先将瓶中内容物摇匀,不同批号试剂盒组份请勿混用。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
严格控制反应时间和显色时间,一次加样时间控制在5分钟内。
本试剂盒为一次性用品,使用后的试剂盒和样本等废弃物应作为传染源按照国家相关规定处理。
底物请避光保存。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准,无效结果必须重测。
本试剂盒采用硫酸作为终止液,其具有轻微的腐蚀性,使用时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。